核酸染料是分子生物学实验中不可或缺的试剂,其中溴化乙锭(EtBr)因其高灵敏度,长期以来一直被用作核酸染色的标准染料。但是EtBr具有潜在的诱变和致癌作用,EtBr能与DNA嵌合,引起细胞突变,长期接触可能对人体健康产生负面影响。NIPPON GENETICS推出的新型MIDORIGreen系列核酸染料,是一种非致癌性和非致突变性的染料,无法穿透乳胶手套和细胞膜。同时致突变性试验(Ames试验)和细胞毒性试验均为阴性,因此是一种高安全度的核酸染料[1]。
紫外光与EtBr染色至今仍一起被用于分子生物学实验室中检测核酸。然而紫外光谱会导致DNA样品的修饰和降解,30秒的紫外线曝光足以大幅降低克隆效率。蓝/绿LED在470 nm - 520 nm处发出安全可见光,这种光谱对 DNA 没有破坏性,与紫外光相比,DNA完整性和克隆/测序效率完全不受影响,即使在长时间的光照下也是如此。MIDORIGreen系列核酸染料经过优化,可在紫外光或蓝/绿光激发时获得更亮的信号,同时也兼容紫外光。
图1:EtBr和MIDORIGreen吸收光谱对比
MIDORIGreen产品特点
出色的信号质量
用于凝胶内染色和后染色的安全核酸染料
溴化乙锭的安全替代品:非致癌无毒
适用dsDNA、ssDNA或RNA染色
胶染法和泡染法均可
MIDORIGreen Advance
MIDORIGreen Advance灵敏度与EtBr相当,可以直接添加到熔融的琼脂糖中。同时兼容紫外线或蓝/绿LED,因此无需更改原有的实验步骤。MIDORIGreen Advance的稀释倍数可高达1:25000。100 mL琼脂糖凝胶只需4μL至6μL,每1mL的染料可配置约17L至25L琼脂糖凝胶。
MIDORIGreen Direct
MIDORIGreen Direct中已经包含10X Loading Buffer,可以直接添加到核酸样品中,无需将其或任何其他染料添加到凝胶基质。相较于在凝胶中添加染料的染色方式,核酸的直接染色消除了背景染色,提供了完美的信噪比。1 mL的 MIDORIGreen Direct足够提供1,000至2,000个样品的染色。
MIDORIGreen Direct可以为下游提供更好的结果。
从琼脂糖凝胶中分离核酸可以进一步下游应用,许多染料,如EtBr甚至SYBR™ Green,由于其嵌入特性,都是强酶抑制剂。而MIDORI Green 染料与 DNA 骨架结合的方式能为下游应用带来更高的效率,包括克隆、测序、PCR等。[2]
MIDORIGreen Xtra是NIPPON GENETIC最新一代核酸染料,针对蓝/绿LED和蓝LED光源进行了优化,可以在琼脂糖凝胶中产生强荧光信号。同时MIDORIGreen Xtra不会对琼脂糖凝胶进行染色,因而具有很低的背景噪音,从而获得出色的信噪比。由于非常低的背景荧光,这使得识别少量 DNA 变得非常容易,因此MIDORIGreen Xtra具有超高灵敏度。
图3:使用MIDORI Green Xtra检测的DNA条带具有超高灵敏度(注:左图使用蓝色/绿色 LED 透射仪进行检测;右图使用蓝色LED透射仪进行检测。)
MIDORIGreen easy
MIDORIGreen easy具有与MIDORIGreen Xtra相同的出色信号质量和低背景,拥有比EtBr更好的信号,MIDORIGreen easy的开发是为了可以轻松替换SYBR®safe,同时染色方案不需要改变。MIDORIGreen Easy的稀释倍数可高达1:10000,100 mL琼脂糖凝胶只需8μL至10μL。
![](/Site/Default/Uploads/kindeditor/image/20240719/638569922717928750.008.png)
图4:MIDORIGreen easy(左)与MIDORIGreen Xtra(右)使用蓝/绿 LED 激发灯。
MIDORIGreen系列检测光谱与灵敏度
产品 |
蓝/绿LED |
蓝LED |
UV-Light |
灵敏度 |
MIDORIGreen Advance |
√ |
√ |
⭕ |
+ |
MIDORIGreen Direct |
√ |
√ |
⭕ |
+ + |
MIDORIGreen Xtra |
√ |
√ |
⭕ |
+ + + |
MIDORIGreen Easy |
√ |
√ |
√ |
+ + |
注: √表示兼容;⭕表示兼容但不推荐;
MIDORIGreen核酸染料系列产品列表
货号 |
品名 |
规格 |
MG04 |
MIDORIGreen Advance |
|
MG06 |
MIDORIGreen Direct (含loading buffer) |
1 ml (10x conc. -可直接添加样品) |
MG10 |
MIDORIGreen Xtra |
1 ml (25.000x -可染色25L凝胶) |
MG12 |
MIDORIGreen Easy |
0.4 ml (10.000x -可染色4L凝胶) |
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